技术平台(之二)--分子生物学技术平台-厦门大学附属中山医院

技术平台(之二)--分子生物学技术平台

发布时间：2010.08.17

分子生物学技术平台与操作规范

第一部分分子生物学实验室介绍

医学中心实验室建设有功能较齐全的分子生物学技术平台,可以开展各种标本（组织、血液、蜡块）DNA、RNA的分离与纯化；质粒DNA大量制备；载体构建、基因表达定量分析等实验研究。配有荧光定量PCR仪、普通与梯度PCR仪、凝胶成像系统、琼脂糖凝胶电泳系统、PCR模板制备工作台、PCR反应洁净工作台、核酸与蛋白定量仪、酶标仪、超净工作台、恒温培养箱、振荡摇床等设备。

第二部分分子生物学实验室操作规范与注意事项

一、琼脂糖凝胶电泳实验

1、实验总体要求

实验区域化、干净、整洁、尽量避免相互污染(污染环境、仪器和实验样品)

2、操作

（1）制胶

① 在固定的水平板上（固定区域）；

② 沸腾的胶不可立即倒入槽里,冷却至60℃倒入；

③ 胶的厚度3-5mm ，电泳缓冲液没过胶1mm ；

④ 实验完毕,将水平板、胶板、梳子清洗干净，整齐放框内。

（2）上样

专用的枪（电泳加样专用、不可拿到PCR室或其它地方）

（3）凝胶成像拍照

① 用洁净的手打开凝胶成像系统和操作电脑；

② 拍完照，取走凝胶，用柔软吸水布将成像系统擦拭干净。

（4）实验结束

凝胶及时丢入垃圾桶、不要倒在水槽里，清理手套、桌面其它物品。

二、天平使用

1 、明确实验的精确度来选择天平（百分之一和千万之一）；

2 、托盘上一定要放称量纸；

3 、称量时，药品体积不要超出称量纸、若药品撒到桌面，及时清理干净；

三、PCR准备室

1 、实验室要求干净、整洁供DNA、RNA提取使用。

2 、操作

① 离心机: 配平、盖好内盖、用完及时关闭；

② 水浴锅 ：及时换水、加水，避免烧干；60℃以上要求使用金属水浴；

③ 洁净操作台：使用完，若有液体倒入或弄脏，请及时清理。

④ 实验结束 手套和其它物品等整理干净、实验物品摆放整齐。

⑤ 配置一套枪,共5支,请勿拿走。

四、普通PCR与荧光PCR仪

1 、普通PCR仪

① 使用请登记，实验完毕，及时取出样品，不要放置过夜

② 最后样品保存温度设在10℃

③ PCR管架不要随便拿走,用完放回原位,更不可拿到电泳区域。

④ 　严禁在PCR仪上进行非PCR反应实验（100加热变性蛋白等）。

2 、荧光定量PCR仪

① 提前预约；

② copy数据的U盘要无毒；

联系电话: 实验室 2292480

平台负责人: 黄建坤游攀姚琴

地点: 6号楼4楼

Applied Biosystems 7500型定量PCR仪

一、用以下四个方面实验研究

1、基因表达（差异表达）分析;

2、病原体绝对定量分析;

3、SNP基因型分析;

4、阳性\\阴性结果判定;

二、支持十种荧光染料

包括：FAM™、SYBR® Green I、VIC、JOE、NED、TAMRA、 Cy3、, ROX、Texas Red、Cy5

三、仪器要求

1、PCR管要求透光好的薄壁管；

2、可用单管或8联管（管要求是平盖透光的）；

3、反应系统不加矿物油（mineral oil）(矿物油会损坏仪器的光学系统) ；

4、反应体积25-100微升

MyCycler普通PCR仪与梯度PCR仪

Agrose电泳

美国伯乐BIO-RAD Gel Doc 2000凝胶成像系系统

核酸蛋白定量仪

酶标仪( 450 、490 、570 、595 、630nm)

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