技术平台(之一)-细胞培养室-厦门大学附属中山医院

技术平台(之一)-细胞培养室

发布时间：2010.08.16

医学实验中心细胞培养室与使用管理

本医学中心实验室设有万级净化细胞培养室,并配有CO2培养箱、生物安全柜、正、倒置荧光显微镜等，为全院提供细胞学研究的公共技术平台，为更好使用本技术平台，特制定如下管理办法。

第一部分 细胞培养室操作规范与注意事项

一、细胞室实验操作

1. 实验前准备

（1）进入培养间之前应洗净双手，准备间更换专用拖鞋、专用白大衣及无粉尘无菌手套；

（2）进入超净室后将所带物品放入生物安全柜中紫外灯照射灭菌；

（3）预热培养基、 PBS 、胰酶等溶液；

2. 实验过程

（1）关闭生物安全柜内紫外灯，打开通风开关；

（2）双臂缓慢进入前窗口后，等待大约 1 min ，再对物品进行处理；

（3）所有操作应在离前窗 10 cm 以外的工作区进行；

（4）小心取用无菌实验物品，勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打

开之容器正上方操作实验；

3. 实验结束

（1）将生物安全柜继续运行 5 min 来完成 “ 净化 ” 过程；

（2）将柜内物品移出前，应使用有效的消毒剂擦拭；

（3）将废液缸内废液及垃圾倒入细胞间外的医疗垃圾桶内；

（4）用 75% 酒精对生物安全柜的台面进行擦拭；

（5）等待 5 min 后，关闭前窗，关灯，关风机；

（6） 物品收拾摆放整齐、及时将废物清理干净并拿出细胞室。

二、细胞室操作注意事项

1. 细胞培养室的各道门每次只能依次打开一扇，避免空气流通造成污染。

2. 每次限操作一种细胞，并且一种细胞对应一瓶培养基，避免细胞交叉污染。

3. 每间细胞间禁止同时进入 4 个人操作，不可在细胞间大声喧哗谈笑和打闹。

4. 如果发生污染请报告管理员，以便及时处理。

5. 非本实验室的人员未经允许不得进入细胞间。

三、细胞室值日规定

1. 每位需要在细胞室培养细胞的实验人员必须参加值日，由管理员统一安排；

2. 每周彻底打扫一次细胞间（ 时间为每周五下午4:30-5:30 ），包括：实验桌面、地板、生物安全柜等。

3. 更换细胞培养箱中水槽的水，加入 1000-1500ml 灭菌后的蒸馏水；

4. 清洗水浴锅，更换水浴锅中的水，加入蒸馏水；

5. 用消毒水（健之素一粒溶于 1L 水）擦拭全部仪器和物品表面，包括门、墙壁、桌面、生物安全柜外表面、培养箱外表面；

6. 用消毒水清洗地板，清洗拖鞋；

7. 观察细胞培养箱的温度和 CO₂ 浓度是否正常，需补充 CO₂ 时及时报告管理员。

第二部分 细胞培养室仪器设备使用与注意事项

细胞间各种设备包括净化系统使用时应小心谨慎，严格按照说明书操作，不可胡乱操作，有异常情况请及时报告管理员。

1 ．空调机组

每天早上第一个进细胞间人员需打开细胞间和生物安全柜的紫外灯20-30分钟灭菌一次，关闭后打开细胞间电源和开启机组，使空调和风机开始运行。每天最后一位实验者使用完毕应关闭机组（夏天7-9月，不关空调机组，保证室内培养箱正常工作）。

2 ．生物安全柜

使用前紫外灯照射20分钟，之后通风5分钟后再开始操作，操作结束后及时清理和消毒，下一人使用前仍需照射紫外灯20分钟。柜内实验物品分区域摆放，禁止放置过多物品以免影响紫外线照射效果。

3 ．二氧化碳培养箱

打开前先用75%酒精消毒双手，打开时应注意不要说话，尽量屏住呼吸，以免污染箱内空气，如发现二氧化碳减压阀显示CO2即将用完，需及时报告管理员，箱体底部的蒸馏水保持饱和湿度，每周一换。放培养箱的细胞瓶请做好个人标记，按规定相对固定的位置格放置培养,做好及时观察和处理，防止细胞培养过久造成染菌、防止他人误拿。

4 ．倒置显微镜 使用后请关闭电源，将防尘布盖好。

5 ．水浴锅

用于预热培养基、PBS、胰酶等溶液，定期更换水与清洁，从水浴锅拿出的瓶子应用75%酒精擦拭后放入生物安全柜。

6 ．细胞间冰箱

仅用于储存细胞培养相关物品，请标注姓名，按规定位置存放，并定期清理。

7 ．移液器

生物安全柜配有1ml、200ul、10ul手动移液器及电动移液器各一把，用前可用75%酒精擦拭，严禁倒吸液体进入移液器内。

8 ．离心机

使用前请注意看说明书，离心前务必配平，小心避免离心管在离心过程中损坏卡住角转子，溅落的液体及时清理，用完关闭电源。

9. 实验台面：实验后，及时清洁台面，保持全天候干净与整洁。

本中心细胞培养室全天开放，管理员联系电话：

实验室电话：0592-2292476

细胞培养室一角(培养箱与生物安全柜)

倒置荧光显微镜

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